EQUIPO 1

Universidad Autónoma Del Estado De México

Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia

MICROSCOPÍA DE ORGANELOS

EQUIPO 1:

Bernabé Jiménez Aranzazú

García Álvaro Monserrat

López Rincón Sandra Aurora

Merino Pallares Cynthia

Rebollar Solís Floribella

INTRODUCCIÓN

Una tinción o coloración es una técnica usada en microscopía para mejorar el contraste de la imagen vista al microscopio, se recurre a la tinción para resaltar las diversas estructuras de los tejidos biológicos que se van a observar. Los tintes nos permiten examinar muestras de tejido, poblaciones celulares y nos pueden ayudar a distinguir los diferentes orgánulos presentes en la célula.

Las tinciones se pueden aplicar a tejidos vivos, denominándose tinción in vivo, o a células extraídas y fijadas en un soporte, denominándose tinción in vitro.

En el siguiente trabajo expondremos las tinciones con las cuales se puede observar a microscopio detalladamente cada organelo celular, por separado.

·         MITOCONDRIA:

Se utilizan dos tipos de tinciones principalmente

Fucsina Ácida: Es un colorante magenta. Ayuda tiñendo los fosfolípidos de las membranas que rodean a la mitocondria.

Verde Janus: Las mitocondrias tienen enzimas oxidativas en su matriz mitocondrial por ejemplo la citocromooxidasa, es posible observar las mitocondrias en células vivas, mediante el método de contraste de fase después de la tinción con verde Jano. La citocromooxidasa es exclusiva de las mitocondrias y mantiene oxidado (visible) el verde Jano. Por el contrario, en el resto del citoplasma se reduce a un compuesto incoloro.

RIBOSOMAS:

Sin basófilos y es por eso que las zonas ricas en ribosomas se tiñen de colores básicos con tinciones como:

Hematoxilina: Tiñe los ribosomas de color azul-violeta.

Azul de Toluidina: Se utiliza para detección de RNA y por lo tanto detecta a los ribosomas.

    APARATO DE GOLGI:

Impregnación Argéntica: También conocida como coloración argéntica o tinción argéntica se basa en el uso de sales metálicas como la plata para modificar el color o apariencia sobre extructuras extremadamente finas.

              Tríxido de Osmio: Sirve como fijador de muestras para observación en                  microscopio electrónico.  Bernabé Jiménez Aranzazú

 Según la naturaleza química del radical del auxocromo los colorantes ácidos son los que tiñen a las vesículas y a los proteosomas pues son sales con el anión coloreado y base incolora son derivados de grupos carboxilos o hidroxilos fenólicos, y tiene apetencia por sustancias básicas sobre todo estructuras proteicas localizadas en el citoplasma celular y también por el colágeno de la matriz extracelular.  Merino Pallares Cynthia.

Vesículas celulares

Una tinción que es exclusiva para fosfolípidos y ya que las vesículas son ricas en estos una tinción que se utiliza es la tinción de la hematina acida de Baker: esta tiñe fosfolípidos y nucleoproteínas de color azul.

Azul de metileno: tiñe células animales hace visible todas las estructuras y especialmente a los núcleos

Eosina: se usa frecuentemente es una de las tinciones más utilizadas tiñe un color que va del rosado al rojo a las estrucutras del citoplasma y la membrana celular y algunas estructuras extracelulares

Proteosomas

Eosina: tiñe proteínas y estructuras con afinidad por los ácidos en diferentes tonos rojos

Rodamina: esta tinción es fluorescente especifica en proteínas utilizada comúnmente en microscopia fluorescente

Azul de metileno: tiñe células animales hace visible todas las estructuras.

Citoplasma  García Álvaro Monserrat

Se usa la técnica HE (hemalumbre – hematoxilina y eosina)

 Eosina: se utiliza muy frecuentemente da un color que va del rosado al rojo al material citoplasmático.

Nucleolo

 Azul de metileno y azul de toluidina: se utiliza para teñir células animales, para hacer más visibles sus nucléolos. La tinción con hematoxilina tiñe de color azul los núcleos.

Mesosomas

 A microscopio óptico se pueden detectar con tinción negativa con ácido fosfotúngstico. 

LISOSOMAS (Floribella Rebollar Solis)

Debido a su heterogeniedad morfológica, estos organelos pueden ser identificados mediante el uso de anticuerpos específicos y por diferentes técnicas histoquímicas en las cuales se emplea el precipitado por la actividad de la hidrolasa con su sustrato.

  Colorantes vitales: rojo neutro y azul de toluidina.

  Colorantes fluorescentes: naranja de acridina.

NUCLEO (Sandra Aurora Lopez Rincon)

Colorantes basófilos(hematoxilina)Tiñe estructuras acidas. como los núcleos celulares en  azul o púrpura.

Tinción de Feulgen. Utilizada para identificar material cromosómico y ADN en células.

Azul de metileno. Se utiliza para teñir células animales, para hacer mas visibles sus núcleos.

Azul Nilo. Tiñe los núcleos de azul. Tinción de células vivas.

Bromuro de etidio. Se intercala con el ADN y le otorga un color naranja fluorescente. No es capaz de teñir células vivas. Puede ser utilizado combinado con naranja acridina. Esa tinción combinada  le otorga a las células vivas un color verde fluorescente mientras que a las células apoptotícas aparecen con una tonalidad fluorescente rojo-naranja.

DAPI. Es un colorante nuclear fosforescente, se excita con luz ultravioleta para producir una fuerte fluorescencia azul cuando se encuentra unido al ADN. No es visible en un microscopio de transmisión simple.

Hoechst. Compuesto derivado bis-benzimidazol que se une al surco menor del ADN. Tiene un color amarillo cuando se encuentra disuelto en agua y emite luz azul cuando recibe luz ultravioleta.

Lugol. Solución marrón que se torna negra en presencia de almidón. Se usa para colorear células y hacer mas visible el núcleo.

Safranina. Colorante nuclear. Tiñe de rojo los núcleos celulares.

Verde de Metilo. Utilizada en microscopia de campo claro, para teñir la cromatina de las células y facilitar su visualización.

Tinción de Masso. Los núcleos aparecen en marrón o negro.

Retículo Endoplásmico

Tinción de Weigert. Tonos azul y violeta.

Tinción con Orceína. Tonos marrón y negro.

Tinción	Tipo	Características	Uso
Hematoxilina	Básica / Acidofílica	Tiñe núcleos, ácidos nucleicos y estructuras basofílicas (mitocondrias y ribosomas) en azul.	Tinción histológica general
Eosina	Ácida / Basofílica	Tiñe proteínas y estructuras con afinidad por los ácidos en diferentes tonos de rojo	Tinción histológica general
Tinción hematoxilina-eosina	Bicomponente Anfifílica	Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina). Los ácidos nucleicos asociados a proteína (ej. ribosomas) en violeta	Tinción histológica general
Tinción hemalumbre-eosina		Similar a la tinción H&E con colores más marcados y definidos	Tinción histológica general

Tinción	Tipo	Características
Tinción HOPS	Policromática	Los núcleos aparecen en azul (hematoxilina).
Tinción de Papanicolau		Permite ver la cromatina con mucha claridad. Los núcleos aparecen de color entre azul y negro.
Tinción con azul de metileno	Supravital metacromática	Tiñe de azul oscuro restos de ácidos nucleicos, y los proteoglicanos ácidos en varios tonos de violeta.
Tinción tricrómica de Masson	Tricrómica	Los núcleos aparecen en marrón o negro.
Tinción de Van Gieson		Los núcleos celulares aparecen en colores de marrón a negro.
Tinción de Movat		Negro = núcleos, fibras elásticas
Tinción argéntica		En función del fijado, tiñe proteínas y ácidos nucleicos en tonos de negro y marrón.

BIBLIOGRAFIA

Gelald Karp. Biología Celular y Molecular Conceptos y Experimentos.6° Edición  Mac Graw Hill.

Ross M.H. y W. Pawlina. Histología: Texto y Atlas en color con Biología celular y Molecular. Ed. Panamericana 6° edición 2013.

Gartner L., Et al, Texto Atlas de Histología, 3ª Edición, México: Editorial Mc Graw Hill, 2008. Pagina 23-24. • Junqueiro L. C.